Arquivos do Mudi, v. 26, n. 3, p. 52 -66, 2022
Aceito em: 21/10/2022Publicado em: 15/12/2022
ARTIGO ORIGINAL
TÉCNICAS DE IDENTIFICAÇÃO QUÍMICA DE METABÓLITOS
PRODUZIDOS POR MICRORGANISMOS ENDOFÍTICOS
Thais Fernanda Misturini
Universidade Estadual de Maringá
Joao Arthur S. Oliveir
Universidade Estadual de Maringá
Resumo
Os microrganismos endofíticos colonizam o interior dos
tecidos das plantas sem causar danos ao seu hospedeiro. A
interação endófito-planta pode originar vias de síntese de
metabólitos de interesse biotecnológico, contudo, para sua
utilização énecessário queesses compostos sejam identificados
quimicamente. Dentre as técnicas instrumentais mais utilizadas
estão a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE),
cromatografia em camada delgada (CCD), cromatografia a gás
capilar (CG), cromatografia a gás capilar acoplada a
espectrometria de massas (CG/MS), cromatografia de fluído
supercrítico (CFS) e eletroforese capilar (EC). Desta forma,
realizamos uma revisão da literatura abordando estas técnicas
de identificação de metabólitos secundários de interesse
biotecnológico produzidos por microrganismos endofíticos. A
pesquisa revelou que estas técnicas instrumentais permitiram a
identificaçãodecoclioquinonas,isocloquinonas,
dicetopiperazinas, ácidotartárico, ácidocítrico,
butirilneosolaniol e outros compostos, produzidos por
endófitos. Estas técnicas instrumentais para identificação e
quantificação de metabólitos são amplamente utilizadas e
aperfeiçoadas. É possível destacar que para cada característica
deamostra e sua finalidade, alguns dos métodos se tornam mais
eficientes eprecisos. Esses métodos paraanálisede metabólitos
devem continuar evoluindo a fim de descobrir novas moléculas
e também gerar uma maior robustez para a identificação e
quantificação destes compostos de origem microbiana,
contribuindo para o avanço dos produtos naturais.
Palavras-chave:Endófitos;interessebiotecnológico;
compostos microbianos; produtos naturais.
Técnicas de identificação química de metabólitos produzidos por microrganismos endofíticos
ANALYSIS OF WEIGHT RELEASE AND BALANCE IN INDIVIDUALS AMPUTED IN THE
PROTETIZATION PHASE
Abstract
Endophytic microorganisms colonize the interior of plant tissues without causing any harm to their host. The
endophyte-plant interaction may originate pathways for the synthesis of metabolites of biotechnological
interest, however, for their use it is necessary that these compounds to be chemically identified. Among the
most used instrumental techniques are the High-Performance liquid chromatography (HPLC), Thin Layer
Chromatography (TLC), Capillary Gas Chromatography (CG), Capillary Gas Chromatography coupled to
Mass Spectrometry (CG/MS), Supercritical Fluid (CSF), and Capillary Electrophoresis (CE). We carried out a
literature review addressing these techniques for identifying secondary metabolites of biotechnological interest
produced by endophytic microorganisms. Our research revealed that these instrumental techniques allowed the
identificationofcoclioquinones,isocloquinones,diketopiperazines,tartaricacid,citricacid,
butyrylneosolaniol, and other compounds produced by endophytes. These instrumental techniques for
identification and quantification of metabolites are widely used and improved. It is possible to highlight that
for each sample characteristic and its purpose, some of the methods become more efficient and accurate. These
methods foranalyzingmetabolites must continueto evolve to discover new molecules and also generate greater
robustness for the identification and quantification of these compounds of microbial origin, contributing to the
advancement of natural products.
Keywords:
Endophytes; biotechnological interest; microbial compounds; natural products.
1. INTRODUÇÃO
Por definição, os microrganismos endofíticos, são fungos e bactérias que passam pelo menos
uma parte de seu ciclo de vida colonizando inter ou intracelularmente os tecidos de plantas, não
causando sintomas de doença ao seu hospedeiro (ZHAO et al. 2011; BERTANI et al. 2016;
CHAUHAN et al. 2019). Estes microrganismos têm ganhado destaque por suas aplicações
biotecnológicas (ZHAO et al. 2011), especialmente na agricultura (OLIVEIRA et al. 2020; EMMER
et al. 2021; OLIVEIRA et al. 2021; RIBEIRO et al. 2021), medicina e indústria com a produção de
metabólitos bioativos (STROBEL, 2018; GOLIAS et al. 2019; POLLIet al. 2020; SILVA et al. 2020;
SILVA et al. 2021) e/ou enzimas (DA SILVA RIBEIRO et al. 2018; FELBER et al. 2019; SANTOS
et al. 2019), além de atuarem como biorremediadores de locais contaminados com substâncias
recalcitrantes e xenobióticas (BULLA et al. 2017).
A interação endófito-planta pode originar vias de síntese de metabólitos de interesse
biotecnológico (CALDERANI; ORLANDELLI; PAMPHILE, 2016) como o Taxol, um dos mais
conhecidos ditepernoides que apresenta atividade antitumoral (LI; ZHENG; LI, 2022), isolada
inicialmente da planta Taxus brevifolia (Pinales: Taxaceae), e também relatada produzida pelo fungo
endofítico Taxomyces andreanae (RIBEIRO, 2015).
Estes metabólitos são produzidos pelos endófitos na parte extracelular da planta, em especial
os fungos endofíticos filamentosos são capazes de produzir uma diversidade de classes químicas de
metabólitos secundários (SPECIAN et al. 2014) que podem apresentar diferentes propriedades
biológicas (RIBEIRO, 2015). A elucidação química desses compostos, pode ser realizada por meio
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Figura 1: Etapas para a obtenção e estudos de metabólitos secundários produzidos por microrganismos endofíticos.
Fonte: Autores, 2022.
de técnicas de separação e caracterização como cromatografias, eletroforese capilar, espectrometria
de massas, entre outras (PRATA; MOGOLLÓN; AUGUSTO, 2016). Uma das grandes vantagens de
se estudar os metabólitos produzidos por microrganismos, notadamente os endofíticos, está
relacionado com as formas de manutenção e produção em larga escala, podendo-se obter essas
moléculas deinteresse em um curto espaço detempo ecom um número baixo decélulas microbianas.
Para a obtenção dos metabólitos, de modo geral, os microrganismos são cultivados em meios
de cultura apropriados para seu crescimento, como BD (Bata Dextrose) para fungos e TSB (Triptona
de soja) para bactérias, e incubados para seu crescimento. O crescimento pode ocorrer em fase
estacionária, ou seja, sem agitação, ou sob agitação em Shaker, incubados em temperatura variável
entre 25 à 37 ºC durante 24 ou 48h para bactérias e 7 a 21 dias para fungos.
Após aobtenção do caldo fermentado, realiza-sea separação das células microbianas do caldo
fermentado por centrifugação e/ou filtração e, do caldo fermentado resultante ocorre a extração dos
metabólitos secundários empregando solventes orgânico adequados. O principal solvente empregado
neste processo de extração é o Acetato de Etila (POLONIO et al. 2016; SANTOS et al. 2017;
GOLIAS et al. 2019; POLLI et al. 2020; BALBINOT et al. 2021; OLIVEIRA et al. 2020; SILVA et
al. 2021). O solvente resultante da extração contendo os metabólitos secundários passa pelo processo
de evaporação para a concentração dos metabólitos. Por fim, o concentrado metabólito pode ser
eluido em metanol, ou outro solvente, e avaliado quanto suas atividades biológicas e caracterização
química. A Figura 1, apresenta um resumo esquemático das etapas descritas anteriormente.
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Técnicas de identificação química de metabólitos produzidos por microrganismos endofíticos
Considerando o potencial dos microrganismos endofíticos como fontes promissoras de
metabólitos secundários bioativos, neste trabalho, realizamos uma revisão da literatura abordando
algumas técnicas para identificação química de metabólitos secundários de interesse biotecnológico
produzidos por fungos ou bactérias endofíticas. Este trabalho torna-se de relevância uma vez que os
microrganismos endofíticos são capazes de produzir uma imensa diversidade de compostos
químicos de diferentes classes (MENG et al. 2012; YANG et al. 2013; YE et al. 2014; CHAGAS et
al. 2016)com variadas atividades biológicas (DZOYEM et al. 2017; LIet al. 2018; RAJIVGANDHI
et al. 2018), no entanto, na maioria dos casos, a elucidação e discriminação dessas moléculas de
origem microbiana têm sido um ponto fraco nos estudos de produtos naturais (MACIÁ-VICENTE
et al. 2018; POLONIO et al. 2022). Assim, esperamos que este trabalho possa contribuir para um
melhor entendimento e aplicação de algumas técnicas para identificação de moléculas microbianas
de interesse biotecnológico, notadamente aquelas produzidas por microrganismos endofíticos.
2. MATERIAIS E MÉTODOS
A pesquisa foi realizada por meio de busca online utilizando as plataformas Google
Acadêmico, SciELO e Portal da CAPES. O levantamento bibliográfico considerou artigos científicos
em português e/ou inglês, além dedissertações eteses, priorizando os anos entre2015 à2021. Alguns
trabalhos anteriores a este período que abordavam a temática escolhida também foram inseridos.
Foram empregados os descritores em português e inglês: microrganismos endofíticos
(endophytic microrganisms) OR fungos endofíticos (endophytic fungi) OR bactérias endofíticas
(endophytic bacteria) AND metabólitos secundários (secondary metabolites), metabólitos
secundários (secondary metabolites) AND endófito (endophyte) AND caracterização química
(chemical characterization), metabólitos de endófitos (metabolites from endophytes) AND
aplicações biotecnológicas (biotechnological applications).
Após a leitura do título, resumo e metodologia, trabalhos que abordavam o isolamento e/ou
identificação química (CCD, CLAE, CG, CG/MS ou CFS) de compostos bioativos (antimicrobianos,
antioxidantes, leishmanicida ou outros) produzidos por bactérias e/ou fungos endofíticos foram
selecionados.
3. RESULTADOS E DISCUSÃO
Até2016, mais de200 mil metabólitos secundários foram identificados apartir deorganismos
vivos, principalmente produzidos por plantas e microrganismos (PRATA; MOGOLLÓN;
AUGUSTO, 2016). Acredita-se que esse número tenha aumentado considerando o avanço das
técnicas instrumentais utilizadas para sua identificação.
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Figura 2: Metabólitos secundários isolados e identificados produzidos por microrganismos endofíticos. Fonte:
coclioquinona A e isococlioquinona A (CAMPOS et al. 2008); Dicetopiperazinas Rel.Ciclo (SOMENSI, 2012); Ácidos
cítrico e tartárico (ARAUJO, 2010); T2-toxina, 8-n-butirilneosolaniol e 8-isobutirilsolaniol (CAMPOS et al. 2010).
Cromatografia em Camada Delgada (CCD)
Essa técnica emprega analises de substancias complexas comparadas com valores de fator de
retenção já conhecidos/estabelecidos. A CCD possui facilidade no seu preparo, baixo custo e não
requer a utilização de equipamentos sofisticados (FUMAGALI, 2008). Está técnica permite ensaios
qualitativos por métodos in situ e indiretos. Os métodos in situ são aqueles que detectam as
Dentre as principais técnicas para a identificação de metabólitos, podemos destacar a
cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), cromatografia em camada delgada (CCD),
cromatografia a gás capilar (CG), cromatografia a gás capilar acoplada a espectrometria de massas
(CG/MS), cromatografia de fluído supercrítico (CFS) e eletroforese capilar (EC), das quais têm sido
amplamente utilizadas e apresentando resultados satisfatórios (PRATA; MOGOLLÓN; AUGUSTO,
2016). A seguir, além de apresentarmos o funcionamento destas técnicas, elencamos alguns
metabólitos produzidos por microrganismos endofíticos. A figura 2, ilustra alguns destes metabólitos
caracterizados empregando estas técnicas químicas.
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substâncias por densitometria, já nos métodos indiretos, as manchas obtidas são extraídas passando
por um método de detecção, como os métodos eletroquímicos, por exemplo (GONÇALVES, 2010).
Campos (2017) realizou a caracterização química empregando a CCD de metabólitos
secundários produzidos pelo fungo Preussia mínima (Pleosporales: Sporormiaceae) isolado como
endófito da planta Vellozia nanuzae (Liliales: Velloziaceae). Para a caracterização dos metabólitos,
os autores empregaram os reagentes de revelação Dragendorff, Liebermann-Burchard,
difenilboriloxetilamina (1 % em metanol) e polietilenoglicol (4000 a 5% em etanol), seguido de
exposição a luz ultravioleta. Utilizando esta técnica, Campos (2017), detectou a presença de
compostos nitrogenados, alcaloides, esteroides e flavonoides no extrato metabólito obtido de P.
mínima extraído com o solvente orgânico acetato de etila. O autor sugere que estas classes de
metabólitos podem estar associadas a capacidade deste endófito no processo de germinação e
crescimento de seu hospedeiro (V. nanuzae).
Santos et al. (2017) também utilizaram a técnica de CCD para caracterizar metabólitos
secundários produzidos por microrganismos endofíticos. Estes autores caracterizaram a presença de
esteroides e triterpenóides no extrato metabólito em acetato de etila dos fungos endofíticos
Phyllosticta sp. (Botryosphaeriales: Botryosphaeriaceae) e Cercospora beticola (Capnodiales:
Mycosphaerellaceae), o que torna esses metabólitos interessantes produtos para fins terapêuticos,
notadamente atuando contra Enterococcus faecalis, Salmonella typhi e Streptococcus pyogenes.
Nascimento Junior et al. (2019), detectaram por meio de CCD 36 compostos oriundos de
fungos isolados de Lippia origanoides (Lamiales: Verbenaceae). Desses compostos, 72% (26),
apresentaram atividade antibacteriana contra a bactéria patogênica Staphylococcus aureus, 47% (17)
com atividade antifúngica contra Candida albicans e 77% (28) apresentaram atividade antioxidante.
Dentre as classes majoritárias de compostos detectadas por Nascimento Junior et al. (2019),
compostos fenólicos, terpenos e esteroides destacaram-se. Com base nos achados desses autores, e
nos citados anteriormente, podemos destacar a importância da técnica de CCD na elucidação de
compostos ativos produzidos pelos microrganismos endofíticos.
Cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE/ HPLC)
A cromatografia líquida de alta eficiência CLAE ou HPLC (High Pressure Liquid
Chromatography) é uma técnica muito utilizada para separação, identificação e quantificação de
compostos presentes em uma mistura (SILVA, 2016). Além da facilidade de preparação do analito,
não sendo necessário a volatilização do mesmo, a CLAE possui uma coluna que proporciona uma
melhor separação dos compostos em relação a cromatografia líquida clássica (SOUZA, 2013).
A CLAE tem alto poder de resolução, tempo de corrida relativamente rápido, grande
variedade de fase estacionária e resultados reprodutíveis, porém, é uma técnica que demanda maiores
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gastos devido à alta pureza dos reagentes utilizados e ao elevado custo de manutenção do
equipamento, além de gerar resíduos que precisam ser tratados posteriormente (SILVA, 2016).
Ao aplicar a cromatografia de alta eficiência na identificação de metabólitos, nota-se que sua
eficiência de separação é menor em relação a técnica de cromatografia a gás capilar (CG). Em
sistemas de HPLC é possível abranger uma grande variedade de metabólitos exigindo apenas que o
analito seja solúvel na fase móvel possibilitando a análise de diversos compostos (PRATA;
MOGOLLÓN; AUGUSTO, 2016).
Metabólitos de interesse biotecnológico já foram identificados empregando esta técnica.
Campos et al. (2008), fracionaram os metabólitos produzidos pelo fungo endofítico Cochliobolus sp.
(Pleosporales: Pleosporaceae) por meio da técnica CLAE. Estes autores isolaram a Coclioquinona A
e Isococlioquinona A, que são substâncias ativas responsáveis por exercer um efeito leishmanicida.
Já Campos et al. (2010), identificaram três micotoxinas (T2-toxina, uma mistura de 8-n-
butirilneosolaniol e 8-isobutirilsolaniol) produzidas pelo fungo Fusarium sp. (Hypocreales:
Nectriaceae) isolado como endófito de Piptadenia adiantoides (Fabales: Fabaceae). Os achados de
Campos et al. (2010) são importantes pois podem contribuir para o desenvolvimento de novos
medicamentos com moléculas bioativas para o tratamento de micoses humanas, como a
paracoccidioidomicose (PCM) causada pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis (Onygenales:
Ajellomycetaceae).
Algumas substâncias apresentam alta importância farmacêutica, como o Taxol. O Taxol, ou
paclitaxel, é uma molécula utilizada para o tratamento de alguns tipos de cânceres, uma vez que essa
molécula é um potente agente que impede a divisão (multiplicação) e crescimento das células,
inviabilizando assim a proliferação de células tumorais (LI; ZHENG; LI, 2022). Em 2018, Andrade
et al. (2018), identificaram por CLAE propriedades químicas semelhantes ao paclitaxel, como o
tempo de retenção (2,62 ± 0,02 min) e massa molecular (852,32 g/mol), no extrato metabólico do
fungo endofítico Colletotrichum gloeosporioides (Phyllachorales: Glomerellaceae).
Além do Taxol, outros compostos de interesse terapêutico, como atividade antioxidante e
imunossupressoras, também já foram identificadas por CLAE. Os fungos endofíticos Fusarium sp. e
Cladosporium sp. (Capnodiales: Davidiellaceae) são capazes de produzir o ácido protocatéquico,
ácido p-hidroxibenzoico, nakijimol, cloranfenicol, ortosporina, cloranfenicol, cítrido-hibridinol,
nidulalina e o ácido asterrico, todos são potenciais moléculas de interesse biotecnológico para área
da saúde (UJAM et al. 2021).
Cromatografia a Gás Capilar (CG)
A cromatografia gasosa é definida como um processo de separação onde a fase móvel é um
gás, e a fase estacionária é um sólido ou um líquido. A CG pode ser classificada pela velocidade de
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Técnicas de identificação química de metabólitos produzidos por microrganismos endofíticos
análise como rápida “Fast-CG”, muito rápida “very fast CG” e ultrarrápida “ultra fast-CG”, e
também pelo tipo de coluna empregada (cromatografia gasosa [CG] e cromatografia gasosa de alta
resolução [CGAR]) (NASCIMENTO et al. 2018).
Devido a característica da análise, para realização da identificação por CG é preciso que os
compostos sejam voláteis, de média e baixa polaridade e baixo peso molecular. Como emprega-se
altas temperaturas, a amostra e seus componentes devem ser termoestáveis, desta forma, dependendo
das características das amostras esse método nem sempre é viável (PEDROSA, 2018).
As colunas CG possuem um número de pratos teóricos maior que colunas usados em sistemas
de CLAE, desta forma atuam na identificação de metabólitos secundários como uma maior resolução
dos picos (PRATA; MOGOLLÓN; AUGUSTO, 2016). Outra característica importante é que a CG
é uma das técnicas mais sensíveis, sendo capaz de detectar metabólitos de baixa massa molecular
voláteis na ordem de 10−12
𝑔
, enquanto a técnica CLAE detecta constituintes na ordem de 10−9
𝑔
(PEDROSA, 2018).
Por estas características, Somensi (2012) utilizou a CG de alta resolução para identificar
metabólitos do fungo endofítico Phomopsis stipata (Diaporthales: Diaporthaceae). Esta autora
identificou algumas dicetopiperazinas (Pro-Val, Pro-Leu, Pro-Phe, Pro-Ile e Pro-Tyr) das quais
podem apresentar diversas atividades biológicas, e uma mistura de acilglicerídeos. A separação e
identificação da mistura de acilglicerídeos foi possível por meio da técnica de CGAR, culminando
no fracionamento de monoacilglicerídeos.
Metabólitos antifúngicos empregando CG já foram identificados, como Butanal, 3-metil-,
Propeno, 2-buteno, 2-heptanona, 6-metil-5-metileno- e 6-oxabiciclo produzidos por bactérias
endofíticas do gênero Bacillus sp. (Bacillales: Bacillaceae) (ERJAEE et al. 2019). Por suas vantagens
em relação em relação a algumas técnicas de identificação química e fracionamento, a CG têm sido
cada vez mais utilizada.
Cromatografia a Gás Capilar Acoplada a Espectrometria de Massas (CG/MS)
Existe a possibilidade de combinar a cromatografia com diferentes sistemas de detecção. O
mais utilizado é o acoplamento com o espectrômetro de massas, apresentando as vantagens da
cromatografia a gás (alta seletividade, resolução e eficiência de separação) com as vantagens da
espectrometria de massas (obtenção da informação estrutural, massa molar e aumento adicional da
seletividade) (CHIARADIA; COLLIN5S; JARDIM, 2008).
Ao submeter as amostras a análise, os componentes presentes no analito são separados pela
CG e após são introduzidos no espectrômetro de massas, por esse motivo a CG é considerada uma
forma ideal de introdução de misturas. Sendo possível então o espectrômetro de massas medir razão
massa/carga (
𝑚
/
𝑧
) de íons que são gerados pela amostra por meio da ionização das amostras
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(PEDROSA, 2018). A técnica de CG/MS apresenta um grande potencial, porém, alguns metabólitos
secundários não são passiveis deserem analisados, como exemplo terpenos com mais de30 carbonos,
vários polifenóis, alcaloides e aqueles que são instáveis termicamente a altas temperaturas,
impedindo com que essas amostras sejam volatizadas (PRATA; MOGOLLÓN; AUGUSTO, 2016).
Diferentes classes químicas podem ser identificadas por CG/MS, como sesquiterpenos
(oxigenados ou não), álcoois (isobutanol, isopentílico, 2-metilbutan-1-ol, feniletílico, entre outros) e
cetonas, todos produzidos por microrganismos endofíticos (OLIVEIRA et al. 2015). Por exemplo, C.
coccodes é capaz de produzir geranilgeraniol, farnesol e esqualeno, já Phyllosticta capitalensis
(Botryosphaeriales: Botryosphaeriaceae) produz 1-Octacosanol. Estes compostos produzidos por
ambos endófitos apresentaram ação antimicrobiana e antioxidante (TALUKDAR et.al. 2020).
Cromatografia de Fluído Supercrítico (CFS)
A cromatografia de fluído supercrítico (CFS) é uma técnica de separação de compostos de
uma mistura que utiliza como fase móvel um fluído que apresenta pressão e temperatura acima dos
limites críticos, sendo intermediaria da CG e da CLAE (SILVA, 2013).
Devido a essa característica de fluidos supercríticos, os cromatógrafos operam em condições
de pressão muito elevadas, sendo necessário um maior cuidado sobre o sistema de bombeamento e
pressurização da fase móvel. A temperatura também se torna um ponto crítico nessa técnica, pois
pode ocorrer uma variação na densidade do fluido interferindo diretamente na volatilização dos
analitos e na seletividade do método (SILVA, 2013).
A CFS tem se mostrado uma técnica muito vantajosa pois apresenta menor consumo de
solvente orgânico, maior estabilidade dos analitos termicamente instáveis, pois existe a possibilidade
de utilizar baixas temperaturas (utilização de CO
2
), além de apresentar um tempo curto de análise
devido à baixa viscosidade e a possibilidade do aumento das vazões da fase móvel (BRUHN, 2018).
Essa técnica é muito eficiente na separação de compostos apolares, polares e ionizáveis,
podendo ser utilizadas colunas de CLAE que existe uma ampla variedade, permitindo também a
separação de compostos quirais (SILVA, 2013).
Eletroforese Capilar (EC)
Podemos definir a Eletroforese Capilar como uma técnica de separação que ocorre por meio
da migração diferencial de espécies iônicas ou ionizáveis em um campo elétrico (CIESLAROVÁ,
2016). A técnicadeEC écaracterizadapela simplicidadeinstrumental eoperacional. Sendo composta
por um sistema de injeção, uma coluna capilar onde ocorre a separação, uma fonte de alta tensão, um
par de eletrodos, um detector e um computador (SPUDEIT; DOLZAN; MICKE, 2012).
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Técnicas de identificação química de metabólitos produzidos por microrganismos endofíticos
A EC tem se tornado uma eficiente ferramenta de separação e identificação de uma ampla
gama de moléculas. Apresenta alta resolução e eficiência, baixo custo operacional, pouca quantidade
de solventes orgânicos, e volumes baixos de analitos quando comparado a CLAE, por exemplo
(ASSUNÇÃO et al. 2008).
Araújo (2010) caracterizou o ácido oxálico, cítrico, tartáricoproduzidos pelo fungoendofítico
Aspergilus niger (Eurotiales: Trichocomaceae) isolado da mangabeira (Hancornia speciosa;
Gentianales: Apocynaceae). A EC foi escolhida pelo autor devido as substâncias serem polares, de
baixo coeficiente de partição fazendo com que os processos de extração não sejam eficientes. Desta
forma foi possível analisa-los através dos caldos fermentados ecompara-los com padrões, realizando-
se então a identificação dos compostos presentes nos fermentados.
4. CONCLUSÃO
Não é de hoje que a humanidade emprega substâncias, muitas vezes em forma de extratos e
chás, como método terapêutico. Muitas dessas substâncias já tiveram o seu efeito cientificamente
comprovado, como o Taxol (Paclitaxel) extraído deTaxus brevifolia, abrindo assim um enormeleque
de possibilidade de exploração de mais moléculas bioativas oriundas de plantas e microrganismos.
Empregar diferentes metodologias de isolamento e identificação química ainda permite a síntese
laboratorial das moléculas efetivamente bioativas, dispensando assim o uso das células microbianas
propriamente ditas.
No geral, nesta revisão destacamos alguns metabólitos secundários produzidos por
microrganismos endofíticos com potencial biotecnológico. As técnicas instrumentais utilizadas para
identificação e quantificação desses metabólitos secundários são amplamente utilizadas e vem sendo
aprimoradas a cada dia sendo possível a utilização do acoplamento de diversas técnicas. Destacamos
que para cada característica de amostra e sua finalidade alguns dos métodos se tornam mais eficientes
e precisos.
Embora exista muita informação disponível nos bancos de dados químicos de produtos
naturais, ainda há uma grande defasagem no que tange as informações para identificação química
dessas substâncias, muitas vezes dificultando inferir com clareza a anotação das moléculas alvo.
Esses métodos devem continuar evoluindo a fim de descobrir novas substâncias e também dar uma
maior robustez para a identificação destes metabólitos, que podem ser empregados nos mais diversos
setores, notadamente na área da saúde, agrícola ou ambiental.
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REFERÊNCIAS
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